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当前许多地方爆发百日咳的流行病，且发现散发性病例，基于现有情况，中国百日咳诊疗与预防指南（2024版）也于近期发布，因此检验人员必须知晓此病原菌的实验室诊断以及诊断时应注意的细节，如采检方式、实验室检验方法等。本篇将着重阐述细菌培养实验室方法的检测。
鲍特氏菌属包括七个菌种：
(1) 百日咳鲍特氏菌：引起百日咳的病原菌。
(2) 副百日咳鲍特氏菌：引起较温和性的百日咳(较短期性)。
(3) 支气管炎败血鲍特氏菌：人与兔、狗或其它家畜接触后，偶尔会因此菌引起类似百日咳的症候。
(4) 霍姆氏鲍特氏菌可引起败血症。
(5) 鸟鲍特氏菌可引起鸟类特别是火鸡的鼻气管炎。
(6) 欣次氏鲍特氏菌。
(7) 伤口鲍特氏菌。
百日咳的临床病程分三个时期：卡他性期、发作期、恢复期。
1
卡他性期
持续1~2星期，主要症状为支气管炎，不断的干咳。
2
发作期
持续2~4星期，甚至更长。其特点是在咳嗽发作末期，出现吸气性哮咳，且经常会咳出浓稠，极黏的黏液。
3
恢复期
持续2~3星期，此时咳嗽已逐渐转好。咳嗽次数减少，严重性减轻，且呕吐渐消失。
百日咳鲍特氏菌的实验室检验方法：
检体的采集以及分离介绍：
1、百日咳鲍特氏菌常黏附于呼吸道具有纤毛的上皮细胞上，因此利用鼻咽拭子收集鼻咽检体的方法比咳碟法的分离率高。
2、过去分离此菌常利用B-G培养基，但因B-G培养基有效期仅为五天，须在接种前新鲜配制，因此甚为麻烦。近年来已改用RL型培养基(里根洛韦培养基)，此培养基的有效期为4~8星期，且分离率较 B-G培养基为高。
3、鼻咽拭子的检体可直接种于适当的百日咳鲍特氏菌运送培养基中，或直接接种分离培养基，分离培养基通常选用二个含有抗生素的RL型培养基；或一个含抗生素的RL型培养基及一个含抗生素的 B-G 培养基，培养基含抗生素的目的系抑制金黄色葡萄球菌，因此菌易扩散整个平板而抑制百日咳鲍特氏菌的生长。
培养步骤：
1. 鼻咽拭子接种后，仍将运送培养基放在 35℃ 培养箱培养，48 小时后再进行次培养。
2. 培养 35℃一般培养箱，培养后对疑似菌进行鉴定。一般培养时间为 7 天，但曾有报告12 天比 7 天的培养分离较多百日咳杆菌。
3. 通常 B-G 培养基上长出的百日咳杆菌可在 3～4天观察到，而副百日咳鲍特氏菌则在 2～3 天观察到，当仅有少数几个菌落溶血不易观察，但若有一大群菌落，则可看到溶血现象。延长培养时间至 12 天能增加 18% 的分离率，当患者获得有效的治疗或其直接荧光抗体试验(DFA)结果为阳性时，可进行延长培养。偶尔平板会有污染菌过度生长， 因此最终报告不能排除百日咳鲍特氏菌的存在。判为阴性的平板在丢弃之前，至少须培养 7 天。
4. 在 RL型培养基生长的百日咳杆菌可在48 小时培养后观察到，相比B-G培养基时间更短。培养18～24 小时后，检查平板有无霉菌或其它可能覆盖平板的蔓延性菌落存在。若有，则接种针先将支撑菌落与其周围的 agar 挖掉，然后每日观察。
5. 百日咳鲍特氏菌也可在分离军团菌的 BCYE α培养基生长。若检验室有专一性抗血清，可操作直接荧光抗体(DFA)抹片，但若抹片太厚，容易引起伪阴性，而一些其它小的革兰氏阴性杆菌，如军团菌，则会引起交叉反应导致伪阳性，因此不能取代培养方法(图 1)。
图 1：诊断百日咳的实验室步骤
鼻咽拭子的正确收集方法：必须收集二支拭子，一支直接接种，另一支作直接荧光抗体镜检。
显微镜下的特性
从生长菌落制作的抹片，百日咳鲍特氏菌呈极小的革兰氏阴性球杆菌，染色极淡，因此革兰氏染色复染时，复红在抹片必须停留 2 分钟。至于副百日咳鲍特氏菌及支气管炎鲍特氏菌，则呈杆菌。
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1
操作简便、成本较低
2
能够直接分离出病原体
3
鼻咽拭子的百日咳鲍特菌分离阳性率高达95%
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